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靶向调控麒麟鸡毛囊的miRNA 筛选和验证

来源:未知 人气: 发布时间:2016-11-15
摘要:李珊珊※ (广东海洋大学,广东湛江 524000) 全身羽毛包被的家禽类动物其羽毛生长调控是一个非常复杂的过程,该过程包括毛囊的发育、分化等生理过程,并且这一过程受到许多相关功能基因以及生长相关因子的调控。麒麟鸡作为罕见的卷羽禽类,其卷羽性状的研究
李珊珊※
(广东海洋大学,广东湛江 524000)
全身羽毛包被的家禽类动物其羽毛生长调控是一个非常复杂的过程,该过程包括毛囊的发育、分化等生理过程,并且这一过程受到许多相关功能基因以及生长相关因子的调控。麒麟鸡作为罕见的卷羽禽类,其卷羽性状的研究价值日益凸显[1]。资料显示该卷羽性状可能与Wnt 信号通路以及该通路的受体蛋白Frizzled 4 有关[2]。miRNA 是一类长约22nt 的小RNA,在转录后水平调控基因的表达。因此,可根据靶标位点筛选出与卷羽麒麟鸡毛囊发育有关的miRNA 及其靶基因。
材料与方法
本试验主要进行靶向控麒麟鸡毛囊的Frizzled 4 基因的miRNA 筛选和验证,为后续验证miRNA与其靶基因的靶标结合位点提供了条件。本实验根据NCBI 和miRBase 库中收录的Frizzled 4 和miRNA(miR-1623,miR-1458,miR-184-3p)序列设计特异性引物,荧光定量PCR 检测Wnt 信号通路的Frizzled4 基因表达及其靶向调控Frizzled 4 基因的miRNA 表达水平。采用GraphPad Prism 5 软件对2-ΔΔct 值进行数据分析。
结果与讨论
Frizzled 4 基因荧光定量分析结果表明:麒麟鸡Frizzled 4 基因表达量高于怀乡鸡Frizzled 4 基因表达量,且差异显著(P<0.05)。荧光定量溶解曲线峰值单一,特异性扩增较好。miRNA 荧光定量结果表明:麒麟鸡miR-1623,mir-1458 表达量高于怀乡鸡,这与Frizzled 4 基因表达量相一致,证明miR-1623,mir-1458 非Frizzled 4 靶基因。而麒麟鸡中miR-184-3p 的表达量低于怀乡鸡,这与Frizzled 4 基因表达量相反。因此,成功的筛选了靶向Frizzled 4 基因的miRNA,为后续研究miR-184-3p 与Frizzled 4 基因靶标结合位点奠定了基础。
参考文献
[1] 杜炳旺,王光琴,陶林,等.抗高温肉用品种麒麟鸡(卷羽鸡)的特性研究[J].中国家禽,2014(增刊):81-87.
[2] Bernard P, Harley VR. Wnt4 action in gonadal development and sex determination[J]. Int J Biochem Cell Biol. 2007, 39(1):31-43.
[3] Ruby J G, Jan C H, Bartel D P. Intronic miRNA precusor of miRNA, pre-miRNA precursors that bypass Drosha processing[J].Nuture, 2007(448): 83-86.
责任编辑:一叶知秋